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MycoTest^TM Kit說明書
（支原體檢測試劑盒）
產(chǎn)品簡介：MycoTest^TM Kit是利用降落聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)（TD-PCR）對支原體16S rRNA 基因高度保守區(qū)域特異性片段進行擴增檢測。該方法靈敏度高，特異性強，可用于各種生物材料（如細胞培養(yǎng)基、實驗動物分泌物、動物血清等）支原體感染的檢測。
MycoTest^TM Kit中所含的Mix 能特異性擴增多種支原體16S rRNA 基因片段，可以達到一次性檢測多種支原體的目的。本試劑盒根據(jù)歐洲藥典中對于生物制藥生產(chǎn)過程中（參考資料：European pharmacopoeia 7.0, 2.6.7.），對于支原體的檢測要求定制而成，與傳統(tǒng)的選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)檢測方法相比較，本方法更為快速，具有高靈敏性，高特異性和高性價比。不會由于培養(yǎng)法檢測時大量培養(yǎng)支原體可能帶來的次級污染的問題。
產(chǎn)品規(guī)格：
 

組分/貨號	NA801（5 rxns）	NA802（20 rxns）
Mix	160 μL	600 μL
Positive	12 μL	22 μL

常見支原體種類：

支原體種類	中文名稱	PCR條帶大小
M. orale	口腔支原體	462 bp
M. hyorhinis	豬鼻支原體	464 bp
A. laidlawii	萊氏無膽甾原體	438 bp
M. salivarium	唾液支原體	466 bp
M. arginini	精氨酸支原體	465 bp
M. fermentans	發(fā)酵支原體	461 bp
M. hominis	人型支原體	463 bp
M.pneumoniae	肺炎支原體	470 bp

運輸方式：
4℃
儲存條件及有效期：
4℃，1個月；長期存儲-20℃，12個月；
操作步驟：
待檢樣品，直接取2 μL上清液作為PCR模板；
（注：懸浮細胞需要1000 rpm 離心4 min）
反應(yīng)體系配置：

無菌水	19 μL
Mix	29 μL
樣品/對照	2 μL

3.PCR反應(yīng)程序：
 

94 ℃	90 s
94 ℃ 70-61 ℃ 72 ℃	30 s 30 s 45 s	20 cycles（每2個循環(huán)降1℃，或者每1個循環(huán)降0.5℃。）
94 ℃ 60 ℃ 72 ℃	30 s 30 s 45 s	20個循環(huán)
72 ℃	4 min

4. 取5ul PCR擴增產(chǎn)物，使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR結(jié)果。