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本試劑盒只能用于科
學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,具體各指標(biāo)使用說明書請聯(lián)系客服索取，本模板為通用模板，僅供參考。
試劑盒檢測原理：
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被樣本 抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。
用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最 終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保 存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何 細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20 ℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬 于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不 用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0的 S0號標(biāo)準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實 際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順 序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明 書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2張 2張 無
說明書 1份 1份 無
自封袋 1個 1個 無
注：標(biāo)準品濃度都不相同，麻煩聯(lián)系客服索取相應(yīng)說明書
試劑的準備：
20×洗滌緩沖液的稀 釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液 ，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板 條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準 品孔和樣本孔，標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL；
3. 樣本孔先 加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔 外，標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔 ，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體 ，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用 洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準 品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標(biāo)準品 線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：最低檢 測濃度小于（參考說明書）
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反 應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅 供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者 承擔(dān)。
試劑盒檢測原理：
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被樣本 抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。
用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最 終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保 存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何 細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20 ℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬 于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不 用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0的 S0號標(biāo)準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實 際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順 序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明 書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2張 2張 無
說明書 1份 1份 無
自封袋 1個 1個 無
注：標(biāo)準品濃度都不相同，麻煩聯(lián)系客服索取相應(yīng)說明書
試劑的準備：
20×洗滌緩沖液的稀 釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液 ，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板 條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準 品孔和樣本孔，標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL；
3. 樣本孔先 加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔 外，標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔 ，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體 ，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用 洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準 品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標(biāo)準品 線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：最低檢 測濃度小于（參考說明書）
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反 應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅 供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者 承擔(dān)。
